Purification and characterization of nattokinase from Bacillus subtilis

Abstract

اجريت عملية تنقية لأنزيم Nattokinase المنتج من بكترياBacillus subtilis  مرتان الأولى بإستخدام الكازين مادة خاضعة والثانية بإستخدام الفايبرين مادة خاضعة، تضمنت خطوات التنقية الترسيب بكبريتات الأمونيوم والديلزة والترشيح الهلامي سيفادكس G-75 والمبادل الأيوني DEAE- Cellulose. أظهرت النتائج وجود ست قمم من البروتين في الترشيح الهلامي وعند إستخدام الكازين مادة خاضعة ظهرت ثلاثة قمم الأولى قمة عريضة أظهرت فعالية تحللية عند إستخدام الفايبرين مادة خاضعة في حين لم تُظهر القمتين الأخريين أي فعالية تجاه الفايبرين لذا تم إهمالهما. وعند إجراء التبادل الأيوني ظهرت قمة واحدة متجانسة عند إستخدام الكازين والفايبرين مواد خاضعة كل على حدا، وتم الحصول على فعالية نوعية بلغت  2494.87 وحدة/ملغم وبلغت عدد مرات التنقية 15.39 وبحصيلة انزيمية 21.31% عند استخدام الكازين مادة خاضعة، في حين بلغت الفعالية النوعية 729.10 وحدة/ملغم وعدد مرات التنقية 6.07 وبحصيلة انزيمية 24.43% عند استخدام الفايبرين مادة خاضعة . جرى توصيف الأنزيم المنقى بمعرفة الرقم الهيدروجيني الأمثل للفعالية ودرجة الحرارة المثلى للفعالية والرقم الهيدروجيني الأمثل للثبات ودرجة حرارة المثلى للثبات إذ بلغت 8، 40 مْ، 8-9 و 30-50  مْ على التوالي ، ويهدف هذا البحث الى تنقية وتوصيف أنزيم Nattokinase  المنتج من بكتريا Bacillus subtilis  للوقوف على أفضل درجة حرارة وpH  أمثل.